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產(chǎn)品中心實(shí)驗檢測服務(wù)細胞實(shí)驗細胞平板克隆形成實(shí)驗
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細胞平板克隆形成實(shí)驗是當單個(gè)細胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細胞群體,稱(chēng)為集落或者克隆。每個(gè)克隆含有50個(gè)以上的細胞，大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力。細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數,但貼壁的細胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆。
product
產(chǎn)品分類(lèi)| 品牌 | 其他品牌 | 產(chǎn)地類(lèi)別 | 國產(chǎn) |
|---|---|---|---|
| 應用領(lǐng)域 | 醫療衛生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
平板克隆形實(shí)驗步驟
1、細胞懸液制備:取對數生長(cháng)期的單層培養細胞，用0. 25%胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細胞，離后用*培養基重懸,制成細胞懸液。
2、細胞種板:將細胞懸液作梯度倍數稀釋?zhuān)悦棵?0、100、 200、 500、1000、 2000個(gè)細胞的梯度密度分別接種含1 ml 37 C預熱培養液的皿中，并輕輕轉動(dòng)，使細胞分散均勻。置37 C 5% Co2的環(huán)境下，靜置培養。
3、細胞觀(guān)察:顯微鏡下觀(guān)察到單個(gè)細胞長(cháng)到20個(gè)以上細胞克隆，培養皿中出現肉眼可見(jiàn)的克隆時(shí)，終止培養。棄去.上清液，用PBS小心浸洗2次。加純甲醇1ml,固定15分鐘。然后去固定液,加適量Giemsa應用染色液染10分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥，手記拍照采集圖像。
4、克隆計數:用肉眼直接計數克隆數，后計算克隆形成率。
結果分析
平板克隆克隆形成率=克隆數接種細胞數x100%
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