你真以為做ceRNA就這么簡(jiǎn)單么？

大家一直都覺(jué)得ceRNA的研究，就是研究LncRNA的簡(jiǎn)便機制了是吧。因為都不用來(lái)論證啥，就直接證明LncRNA和對應的mRNA能同時(shí)結合miRNA就行了，不是么？

其實(shí)，也不全是，當然，要是把ceRNA作為低分的LncRNA研究機制的話(huà)，那簡(jiǎn)單的就是做一個(gè)Luciferase實(shí)驗：

也就是利用Luciferase的3'UTR結合miRNA，來(lái)驗證一下lncRNA和mRNA是不是分別能和miRNA結合。這個(gè)都是研究miRNA的基本套路。

但LncRNA并不會(huì )表達蛋白，所以用Luciferase的方法，并不靠譜。所以就需要通過(guò)別的實(shí)驗來(lái)驗證。

用于ceRNA研究的常用的方法還有MS2-RIP,就是體外過(guò)表達LncRNA的時(shí)候，在末端接上一個(gè)MS2蛋白結合的串聯(lián)序列，然后用MS2蛋白用RNA免疫共沉淀（RIP）的方法拉下來(lái)。當然LncRNA上會(huì )帶有結合的miRNA，把拉下來(lái)的miRNA做real-time PCR就可以了。

當然，類(lèi)似的方法，還有用生物素標記LncRNA的RIP，同樣也是將LncRNA拉下來(lái)，然后再通過(guò)Real-time PCR來(lái)看結合上去的miRNA的表達。

其實(shí)這兩種方法，都有異曲同工的作用，就是驗證LncRNA與miRNA的結合。但是這兩種方法，其實(shí)也不能解釋mRNA是否能與LncRNA形成ceRNA的關(guān)系。于是就產(chǎn)生了這樣的方法：

由于miRNA形成RISC復合體結合的時(shí)候，是被AGO蛋白包裹的，主要是AGO2。也就是說(shuō)，拉下AGO2蛋白，就能拉下結合在上面的miRNA，這樣RISC結合的LncRNA以及mRNA也會(huì )被拉下來(lái)。這就是AGO2-RIP，也就是通過(guò)拉miRNA，來(lái)分析miRNA結合的LncRNA以及mRNA的量：

用這種方法，可以相對直接地研究ceRNA之間的關(guān)系。當然，在較高分的ceRNA的研究中，這種方法也是被經(jīng)常用到的。