胎鼠皮層神經(jīng)元的原代培養

一、背景
大腦皮層是調節軀體運動(dòng)的高級中樞。它由初級感覺(jué)區、初級運動(dòng)區和聯(lián)合區三部分構成。人類(lèi)大腦皮層的神經(jīng)細胞約有140億個(gè)，面積約2200平方厘米，主要含有錐體形細胞、梭形細胞和星形細胞（顆粒細胞）及神經(jīng)纖維。

體外原代培養神經(jīng)元作為神經(jīng)科學(xué)研究的有力手段，越來(lái)越受到廣大科研工作者的重視。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細胞，動(dòng)物出生后很少分裂，相對于其它細胞而言，神經(jīng)元在體外更難以存活和生長(cháng)。因此，體外培養神經(jīng)元要求的培養方法和營(yíng)養條件均較為特殊。

二、實(shí)驗步驟
1. 無(wú)菌條件下，從懷孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入預冷的無(wú)鈣、鎂平衡鹽溶液中；
2.在解剖顯微鏡下，分離取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織（1mm3），加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內消化10 分鐘，期間搖晃一次；
3.去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清；剩余沉淀加入終止液繼續吹打5-10次;
4.所收集的上清過(guò)濾后，將細胞懸液于4℃1000rpm離心10min ，棄上清，管內加入新鮮培養液重懸；
5.臺盼藍染色計數，以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板，37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養箱中培養；
6.每周換液兩次，每次半量換液